CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法

本发明涉及CRISPER-Cas9系统介导的羊MSTN基因敲除和定点整合外源基因的方法，其是根据羊的MSTN基因序列，构建基于CRISPER-Cas9系统的gRNA表达载体，并根据gRNA作用位点构建含有外源基因的且可以整合至宿主基因组中的供体质粒，然后将优化的CRISPER-Cas9载体、上述构建的gRNA表达载体和线性化的供体质粒共同转入羊的成纤维细胞中，获得羊MSTN基因敲除且定点整合外源基因的细胞。本发明构建的CRISPER-Cas9介导的打靶载体为羊MSTN基因的敲除和外源基因的定点整合提供了一种简便快速安全的途径，大大提高了转基因细胞系的筛选效率。该方法实现了不添加任何筛选标记即可筛选定点整合外源基因细胞系，大大提高了转基因动物的安全性，对羊的遗传育种具有重要价值。q

1.买家委托交易经纪人服务，与交易经纪人签定《交易合同》，并按合同约定付款方式支付款项；

2.交易经纪人确定收到合同约定款项后，与卖家签定《交易合同》，支付合同约定款项；

3.卖家确定收到合同约定款项后，向交易经纪人交付《专利转让委托书》、《转让协议》、《解聘书》各一式两份；

4.交易经纪人确认材料无误后，若买方自行办理转让，则交易经纪人将《专利证书》及转让材料原价交付买方，至此合同完成；

5.若买家委托交易经纪人代办转让手续，交易经纪人确认材料无误后提交办理国家手续，国家专利局1个月左右下发《专利转让手续合格通知书》， 交易经纪人确认转让成功后支付合同约定剩余款项给卖方，并交付《专利证书》、《专利转让手续合格通知书》原件给买方，至此专利转让合同完成。

1.买家交易款项将暂保管于九知网担保账户，九知网全程资金代管，保障买卖双方资金安全。

2.选择委托经纪人服务，均由交易经纪人验证交易品和买卖双方身份信息真实有效性。

3.九知网专属律师事务所将对委托交易全程监督，确保所有交易合同及相关文件合法有效。

4.选择委托经纪人服务，并由九知网向卖家代付定金；待国家知识产权局下发手续合格通知书、并经九知网核实后，支付卖家尾款。

5.选择委托经纪人服务，将由交易经纪人代办国家手续，客户随时可查进度。